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免費代測人癌胚抗原elisa試劑盒說明書
更新時間:2014-01-22   點擊次數:1845次

自1965年Gold等首先從人結腸組織發現一種蛋白質,因這種抗原也在胎兒腸道中發現,因而稱為癌胚抗原(eaneino embryoniv antigen,CEA)。CEA屬于非器官特異性腫瘤相關抗原,分泌CEA的腫瘤大多位于空腔臟器,如胃腸道、呼吸道、泌尿道等。人癌胚抗原elisa試劑盒說明書CEA經胃腸道代謝,而腫瘤狀態時CEA進人血和淋巴循環,引起血清CEA異常升高。在結腸癌檢測中 CEA是zui常用的腫瘤標志物,但對于病變限于腸壁以內者卻極少出現CEA升高,故CEA很難對結腸癌作早期診斷。80年代陸續發現了CAI、和CA242,他們的zui大臨床價值是對胰腺癌的檢測,但也經常把這兩種標志物與CEA合用,以提高結直腸癌的診斷和治療水平。其中以CEA為的標志物。
【原理】
    利用雙抗體夾心技術,將抗CEA的單克隆抗體包被于聚苯乙烯塑料珠上,制成固相抗體珠,用此珠去吸附樣品中的CEA,充分洗滌后再依次與酶標記CEA抗體與底物反應,以成色后的吸光度值從劑量反應曲線查得樣品中的cEA含量。
【試劑】
    1.CEA標準液 用純化CEA配制為濃度分別為0、1.5、3.0、10.0、20.ong/ml系列標準液。
    2.CEA抽提液0.Zmol/L醋酸鈉緩沖液(pHS.0)。
    3.基質應用液取鄰苯二胺80mg溶于pHS.O磷酸一拘攤酸緩沖液50ml中,56℃水浴中助溶。*溶后加人新鮮的30%HZ認20川,混勻。此基質液呈無色透明液體,若顯不能使用。將此底物液貯于棕色瓶中,30而n內用完。
    4.辣根過氧化物酶(HRP)標記的抗CEA抗體。
    5.洗滌液0.osmol/LP贅(pH7.40)一0.1%Tween一20.
    6.抗CEA單克隆抗體包被的圓珠.
    7.待檢血樣血清(漿)。
【操作步驟】
    1.待檢抗原的制備取待檢血清或血漿0.sml,加0.Zmol/L醋酸鈉緩沖液
(pHS.o)1.oml,混勻后于70℃水浴內15min。以3 000r/而n離心10而n。取上清液作
為3倍稀釋的待檢抗原。陽性對照品必須同步處理。
    2.在20孔反應板上每孔中加人上述(*步操作)待檢抗原0.Zml。同時加人
CEA標準抗原及陽性對照抗原。每份樣品均作平行兩孔。
    3.用鑷子夾起CEA固相抗體珠,甩掉附著的液體后投人孔內。反應板上班蓋一張
干凈紙,將板漂浮于37℃水浴中反應Zh。人癌胚抗原elisa試劑盒說明書注意勿蓋水箱蓋,反應完成后可連續操作或
置4℃過夜。
    4.用PBS一Tween一20洗滌液洗滌3次。每次加入洗滌液后放置3而n再抽凈(負壓抽吸)洗液。zui后一次洗液放人后靜置至準備加酶標記抗CEA之前時再抽凈。
    5.二抗液制備 取每支凍干的酶標記抗CEA抗體用蒸餾水1.Oml溶解,因凍干時加有明膠保護劑,溶解時須放置37℃水浴中lmin。待充分溶解后再按要求稀釋至zui適工作濃度。
    6.將孔中洗滌液抽凈,每孔加人酶標記抗CEA工作液0.Zml,將反應板用干凈紙覆蓋后再漂浮于37℃水浴中反應2h,勿蓋水箱蓋。
    7.用PBS一Tween一20洗液洗滌4~5次。末次洗液放人后靜里至加基質液前。
    8.將孔中洗液抽凈,把反應板與裝有75mmX12mm試管的20孔紙盒按編號對好位置,翻轉反應板使扣在紙盒上,將圓珠對號移人紙盒上的試管中,每管加人新鮮配制的底物應用液0.3ml。另取一支干凈試管加基質應用液。.3ml,供測定吸光度時調零使用。避光,室溫中反應30min。
    9.每管加人lmol/L HCI 2.0ml終止反應.
    10.于492nm波長處,1.0cm比色皿用空白管調零,測定吸光度(應于終止反應lh內完成)。
【參考范圍】
    正常成人(96%~97%)血清CEA含量<2.5拌g/L;
    大量吸煙者(20%~40腸)>2.5拌g/L,有的甚至>5拌盯Lo
【注意事項】
    1.由于CEA提純和單克隆抗體制備的技術很復雜,目前臨床上多購買廠家生產的試劑盒進行測定.不同廠家生產的CEA診斷試劑,由于方法學及抗血清特異性的差異,測定值可能會有差別。不同批號的試劑嚴禁混合使用。試劑盒應4℃存放,并避免強光照射。
    2.20孔反應板及試管使用后,反應板可用洗板機清洗;也可用水洗凈,后浸泡于硫酸一鉻酸洗液中,再經自來水、蒸餾水沖洗干凈,干燥后可再次使用。
    3.基質液配制與使用過程中,禁與金屬物品或其他氧化物接觸,不得使用塑料容器。
    4.受檢血清應新鮮,避免反復凍融。
【臨床意義】
    1.測定胃液和唾液的CEA對胃癌的診斷較有意義。胃液中的CEA含量一般高于血清中含量的1.5~15.5倍,而且較血中CEA升高較早。如果血中CEA在高水平上波動,而胃血CEA比值>1,則有利于胃癌的診斷,預后不良。唾液中的CEA更高于胃液,唾液CEA顯著升高時與胃癌診斷的符合率高達90%.
    2.CEA是各臟器癌的廣譜腫瘤標記物,特異性差,無助于各種腫瘤的早期診斷,但有助于鑒別腫瘤的良性和惡性。CEA測定可作為腫瘤手術成敗的檢測指標,對腫瘤的復發、轉移及預后判斷有一定的價值。
    3.高濃度的血清CEA含量與結腸癌相關,人癌胚抗原elisa試劑盒說明書但無早期診斷價值。CEA升高也見于腸梗阻、膽道梗阻、尿毒癥、胰腺炎、肝硬化、結腸或直腸息肉、潰瘍性結腸炎、局限性腸炎和潰瘍病。
 

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